Promocell培養基的管理與使用是細胞培養實驗成功的關鍵之一,涉及儲存、配制、無菌操作、日常維護等多個環節。以下是詳細的規范和注意事項:
一、Promocell培養基儲存管理
1.溫度控制
未開封時:根據說明書要求存放于2℃~8℃冰箱(冷藏),避免冷凍導致成分變性或沉淀析出。部分特殊培養基可能需要避光保存(如含血清或光敏感添加劑)。
已開封后:短期使用的瓶口需用75%酒精擦拭消毒,并盡快放回冰箱;長期不用的剩余培養基應標記開封日期,優先使用舊批次以減少降解風險。
注意:反復凍融會破壞生長因子活性,嚴禁將大包裝分裝后多次解凍!建議按實驗需求量分裝成小管冷凍保存(-20℃),使用時單向融化取用。
2.有效期監控
嚴格遵循包裝標注的有效期限,過期產品即使未用完也不可繼續使用。若發現顏色異常、渾濁或沉淀增多,提前報廢處理。
對于添加了抗生素(如青霉素/鏈霉素)的培養基,更需關注有效期,因抗生素效力會隨時間下降。
3.防污染措施
儲存區域專用于培養基存放,遠離揮發性化學品、強酸強堿等污染物。不同種類的培養基分開放置,避免交叉混淆。
定期清理冰箱,丟棄廢棄容器并消毒貨架,防止霉菌滋生污染庫存。
二、Promocell培養基使用前準備
1.預熱與平衡
從冰箱取出后置于室溫下回暖至約37℃(哺乳動物細胞適用),或根據目標細胞類型調整至適宜溫度。可直接水浴加熱但避免劇烈震蕩產生氣泡。
使用前輕輕顛倒混勻數次,確保添加物均勻分布(尤其含血清或碳酸氫鈉的培養基易分層)。
2.補充成分添加
血清/FBS:胎牛血清需滅活后按需比例加入(通常5%~20%),注意不同批號血清的性能差異可能影響實驗結果一致性。
雙抗溶液:若基礎培養基不含抗生素,則每100mL添加1mL青鏈霉素混合液(終濃度約100U/mL)。
其他因子:如谷氨酰胺、丙酮酸鈉等不穩定成分應在臨用前現配,避免長時間暴露失效。
3.pH校準驗證
用精密pH計檢測調整后的酸堿度是否符合目標范圍。可用CO培養箱內的緩沖體系自然平衡,或微量滴加NaOH/HCl調節。
新舊培養基對比測試:觀察指示劑顏色變化判斷是否需要進一步調校。
三、Promocell培養基無菌操作規范
1.生物安全柜內作業
所有涉及開放瓶口的操作必須在層流超凈工作臺中進行,包括倒取、移液、混合等步驟。操作前紫外照射30分鐘并開啟風機運行至少5分鐘驅散臭氧殘留。
穿戴適當的個人防護裝備(實驗服、手套、口罩),減少人為引入污染的風險。
2.避免微生物污染
嚴禁直接用手觸碰瓶口內部,傾倒時傾斜瓶身讓液體沿壁流下,避免垂直倒入產生飛濺。吸管尖*不應接觸瓶內未使用的液體部分。
每次取用后立即旋緊瓶蓋,并用70%酒精擦拭外表面消毒后再歸位。疑似污染的培養基應立即高壓滅菌處理。
3.過濾除菌必要性
對于自制培養基或補充新鮮成分的情況,必須經過0.22μm濾膜過濾除菌后方可使用。市售預混培養基通常已滅菌處理,但仍建議一次使用時做無菌測試(如涂布平板法確認無雜菌生長)。